تحریک خاموشی ژن با استفاده از سازه با قابلیت ترانویسی از دو جهت

قطعه­ای دی.ان.ای (dna) ازیک دی.ان.ای مکمل (cdna) ژنوم کامل ویروس برگ قاشقی سیب زمینی(plrv)  که بخشی ازژن رپلیکاز ویروس را شامل می­شود، به وسیله واکنش زنجیره­ای پلی مراز (pcr) تکثیرگردید. قطعه حاصل به حالت سنس(sense)  به درون یک پلاسمید ناقل در محل همسانه­سازی چند اتصالی (polylinker cloning  site) آن که ازهر دو طرف به وسیله یک پیش بر احاطه شده است الحاق گردید. بدین ترتیب نسخه­برداری همزمان سنس و آنتی سنس (antisense) آر.ان.ای پیک (mrna) صورت می­پذیرد. گیاهان توتون و سیب زمینی با استفاده از آگروباکتریوم با سازه مورد نظر تراژن شده و گیاهان کامل باززایی شدند. با آلوده­سازی مصنوعی گیاهان تراریخته توتون ( مایه­زنی با شته) و سیب زمینی (با استفاده ازپیوند) مقاومت به ویروس برگ قاشقی سیب زمینی در آنها ارزیابی شد. 59 درصد از لاین­های تراریخته توتون که با سازه مورد نظر تراریخت شده بودند عیار کمتری از ویروس را دارا بودند در حالی که لاین­های تراریخته با سازه­هایی که تنها حالت سنس یا آنتی سنس ژن مورد نظر را بیان می­کردند دارای عیار بالاتری بودند. در گیاهچه­های تراریخته شده سیب زمینی که با پیوند مایه­زنی شدند هیچ یک از لاین­ها مقاومتی در برابر ویروس نشان ندادند. با استفاده از یکی از آغازگرها در ترانویسی معکوس، بیان ترادف مورد نظر به صورت سنس و آنتی سنس در لاین­های تراریخت شده توتون نشان داده شد. این نخستین باری است که چنین ساختاری، قادر به بیان آر.ان.ای پیک از هر دو جهت ژن، آزمایش می­شود. به نظر می­رسد که بیان همزمان سنس و آنتی سنس آر.ان.ای پیک از ژن مورد نظر و به دنبال آن تشکیل آر ان ای دو رشته توانسته است خاموشی ژن پس از ترانویسی را القا نماید.